鉻是人和動(dòng)物必需的微量元素，鉻分為無(wú)機(jī)鉻和有機(jī)鉻。無(wú)機(jī)鉻（如硫酸鉻、三氯化鉻等）生物活性非常低，生物利用率只有0.4%～3.0%，而有機(jī)鉻的生物利用率達(dá)到10%～25%。目前市場(chǎng)上有機(jī)鉻主要有吡啶甲酸鉻、酵母鉻、煙酸鉻。吡啶甲酸鉻又稱吡啶羧酸鉻，是吡啶甲酸與鉻化合物的絡(luò)合物，分子式為Cr（C6H4NO2）3，分子量為418.33，系紫紅色結(jié)晶性細(xì)小粉末，流動(dòng)性良好，常溫下穩(wěn)定，微溶于水，不溶于乙醇。其中鉻為三價(jià)鉻，可順利通過(guò)細(xì)胞膜直接作用于組織，能增強(qiáng)胰島素活性，改善人體糖代謝；促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)、蛋白質(zhì)合成、性腺發(fā)育，提高排卵質(zhì)量、繁殖性能等效果，并且毒性甚微，使用安全，目前被認(rèn)為是人類最好的補(bǔ)鉻制劑和畜禽補(bǔ)鉻的理想添加劑，同時(shí)還是有機(jī)鉻中惟一得到美國(guó)國(guó)家安全認(rèn)可的鉻化合物，主要應(yīng)用于醫(yī)藥、保健食品和飼料添加劑。目前對(duì)吡啶甲酸鉻含量測(cè)定多見(jiàn)于保健食品中，對(duì)飼料中吡啶甲酸鉻的含量測(cè)定方法則鮮見(jiàn)報(bào)道。山東譜析公司對(duì)飼料中吡啶甲酸鉻用高效液相色譜法進(jìn)行研究，方法簡(jiǎn)便、快速、靈敏度高，適用于飼料生產(chǎn)企業(yè)中吡啶甲酸鉻的質(zhì)量控制。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

高效液相色譜儀，配置二元高壓泵、自動(dòng)進(jìn)樣器、紫外檢測(cè)器、色譜工作站。

吡啶甲酸鉻標(biāo)準(zhǔn)品為美國(guó)USP公司產(chǎn)品，純度99.9%；甲醇、乙腈均為色譜純，磷酸二氫鈉為優(yōu)級(jí)純，其余試劑均為分析純。

1.2 方法

1.2.1 色譜條件 色譜柱：Waters Xbridge TM C18（5 μm，4.6 mm×250 mm），檢測(cè)波長(zhǎng)263 nm，流動(dòng)相，乙腈∶0.1 mol/L磷酸二氫鈉水溶液（用0.1 mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)至pH=8.5）=10∶90（V/V），流速1.0 mL/min，柱溫30 ℃，進(jìn)樣量10 μL，分析時(shí)間20 min。

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制 稱取吡啶甲酸鉻標(biāo)準(zhǔn)品25.0 mg置于25 mL量瓶中，加甲醇充分溶解后，用pH 8.5的水溶液（用濃度為0.1 mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)）定容，搖勻，吸取該溶液3 mL移入25 mL容量瓶中，用pH 8.5的水溶液定容，搖勻，備用。

1.2.3 樣品溶液的制備 稱取樣品1.250 0 g用甲醇充分溶解后，用pH 8.6的水溶液定容到25 mL容量瓶中，超聲波提取5 min，用針頭過(guò)濾器過(guò)濾，吸取該溶液1 mL至25 mL容量瓶中，用pH 8.5的水溶液定容，搖勻，備用。

2 結(jié)果與分析

2.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的確定

稱取吡啶甲酸鉻標(biāo)樣適量，按“1.2.2” 項(xiàng)下配制標(biāo)準(zhǔn)溶液，于200～400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描，在263 nm處有最大吸收，故選263 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)，在該波長(zhǎng)處檢測(cè)靈敏度較高。

2.2 流動(dòng)相的選擇

對(duì)吡啶甲酸鉻進(jìn)行液相色譜分析時(shí)，如采用甲醇-水流動(dòng)相體系，保留時(shí)間為2.72 min[7]，分離效果明顯不如使用乙腈-磷酸鹽緩沖溶液體系，選擇了乙腈-磷酸鹽緩沖溶液作為流動(dòng)相，在試驗(yàn)中觀察到吡啶甲酸鉻在中性條件下有離解的現(xiàn)象發(fā)生，吡啶甲酸鉻在有水的環(huán)境中可轉(zhuǎn)化為吡啶甲酸和吡啶酸鉻二聚體，考慮到很多金屬離子的絡(luò)合物需在堿性條件下才能穩(wěn)定，經(jīng)試驗(yàn)在高pH條件下樣品不再發(fā)生變化（圖2），故選定乙腈-磷酸二氫鈉水溶液（0.1 mol/L用氫氧化鈉調(diào)至pH 8.5）（10∶90，V/V）為流動(dòng)相。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線制作

按“1.2.2”項(xiàng)配制濃度為0.08、0.10、0.15、0.20、0.25 mg/mL吡啶甲酸鉻標(biāo)準(zhǔn)溶液，在給定的儀器條件下進(jìn)行液相色譜分析，測(cè)得各吡啶甲酸鉻標(biāo)準(zhǔn)溶液的相關(guān)峰面積。回歸方程為y=78.3x-38 300.0；相關(guān)系數(shù)（R2）為0.999 7，結(jié)果表明吡啶甲酸鉻在2.5～0.8 μg范圍內(nèi)色譜峰面積與進(jìn)樣量呈良好的線性關(guān)系。標(biāo)樣圖譜見(jiàn)圖2。保留時(shí)間為6.072 min。