高效液相色譜儀測(cè)定發(fā)酵食品中有機(jī)酸
依據(jù)國(guó)標(biāo)GB T32098-2015對(duì)生物發(fā)酵法中有機(jī)酸的分類,單羧酸和二元羧酸在發(fā)酵食品中普遍存在。本文采用液相色譜儀以及復(fù)合模式色譜柱對(duì)發(fā)酵食品中4種單羧酸進(jìn)行分離,流動(dòng)相中未添加離子對(duì)試劑,也沒有使用高水相體系,配合 WAX-1色譜柱,提高了4種有機(jī)酸的分離和保留。4種有機(jī)酸在其適宜的濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(10-1000ug/mL,r-2=0.9999),LOD在1.1~1.4μg/mL之間,LOQ在4~5μg/mL之間,均能滿足發(fā)酵食品中單羧酸的檢測(cè)要求。
【儀器/耗材清單】
1.1 儀器:高效液相色譜儀LC-1000型,配置紫外檢測(cè)器,分析天平,離心機(jī),組織搗碎機(jī),研缽,三角瓶,水浴鍋,過濾器
1.2 WAX-1色譜柱(250mm×4.6mm,5um)
【實(shí)驗(yàn)/設(shè)備條件】
2.1 乙腈(色譜純);實(shí)驗(yàn)用水為Milli-Q去離子水;磷酸er氫鉀(色譜純,99%) 磷酸(分析純)
2.2 測(cè)試用標(biāo)準(zhǔn)品:甲酸(LCMS純)乙酸(LCMS純);乳酸(食品級(jí),95%),丁酸(色譜級(jí))
2.3 色譜條件
色譜柱:Thermo Acclaim Mixed-Mode WAX-1(250mm×4.6mm,5um)
柱溫:30 ℃;
進(jìn)樣量:10 μL;
流速:0.8ml/min;
檢測(cè)波長(zhǎng):UV210nm;
流動(dòng)相:乙腈:25mmol磷酸er氫鉀(磷酸調(diào)PH3.93)(40:60),等度洗脫。
【樣品提取】
3. 1 儲(chǔ)備液:分別精確稱取四種有機(jī)酸適量,水溶解,配制儲(chǔ)備液 1000 μg/mL。
3.2 系列標(biāo)準(zhǔn)曲線:水溶劑,配制系列標(biāo)準(zhǔn)溶液10μg/mL– 1000μg/mL
3.3 供試品:精密稱取酸奶1.2g,加8mL水,振搖1min,定容到10mL,4500r/m離心10min,過濾,取續(xù)濾液作為上機(jī)溶液。精密稱取固體酵素1g,加8mL水,振搖1min,定容到10mL,4500r/m離心10min,過濾,取續(xù)濾液作為上機(jī)溶液。
【實(shí)驗(yàn)/操作方法】
4.1 重復(fù)性測(cè)試
采用上述儀器分析方法,4種單羧酸在20分鐘內(nèi)均可獲得良好的色譜峰,分離效果良好。圖1為四種有機(jī)酸200ppm濃度色譜圖,各峰面積及保留時(shí)間RSD%值均小于0.6%,其中各化合物測(cè)試結(jié)果見表2。
4.2 線性范圍測(cè)試
采用上述儀器分析方法,對(duì)4種有機(jī)酸進(jìn)行線性范圍測(cè)試,線性相關(guān)系數(shù)r2均大于0.999,線性關(guān)系良好。4種有機(jī)酸線性范圍、線性相關(guān)系數(shù)、LOD(S/N>3)及LOQ(S/N>10)結(jié)果見表2,化合物線性方程圖見圖2。
4.3 樣品測(cè)試
對(duì)市售的發(fā)酵酸奶和固體酵素飲料進(jìn)行有機(jī)酸檢測(cè),乳酸均檢出,其他干擾物與乳酸及其他幾種有機(jī)酸位置互不影響。
【實(shí)驗(yàn)結(jié)果/結(jié)論】
4.1 WAX-1色譜柱獨(dú)特的復(fù)合模式鍵合相,同時(shí)兼具反相和弱陰離子交換兩種交換模式,此方法報(bào)告中4種有機(jī)酸主要通過離子交換模式進(jìn)行保留,相比C18而言,具有不需要高水相,不需要添加離子對(duì)試劑的優(yōu)勢(shì)。方法重復(fù)性良好,4種有機(jī)酸在10-1000ppm范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,高濃度有機(jī)酸峰形尖銳對(duì)稱。
4.2 本方法非常適合用于發(fā)酵食品中單羧酸的檢測(cè)。
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