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液相色譜儀重要部件維護小技巧

2021-02-26 10:53:45來源:admin
液相色譜儀組成部分:流動相溶劑瓶→高壓泵→進樣器→色譜柱→檢測器→廢液,譜析色譜小編按照此順序來一一說明如何做保養(yǎng)
 
一、液相色譜儀流動相溶劑瓶的保養(yǎng)
 
溶劑瓶是流動相的起點,通常是盛放水相溶液或是有機相溶液。
 
1、水相溶液,對于水相溶液來說,首要的問題是防止污染。對于溶劑瓶我們要做的非常重要的工作就是勤換流動相,常換常新。
 
2、有機相溶液,對于有機相溶液,可以不用擔(dān)心細菌繁殖的問題。但是有機相容易發(fā)生聚合,特別是乙腈在適宜的光照條件下極易發(fā)生聚合,瓶子里就會出現(xiàn)一些絮狀的聚合沉淀物。為了防止聚合過程的發(fā)生,裝乙腈時要用棕色的溶劑瓶,避免陽光直射,更換乙腈時應(yīng)當(dāng)棄去瓶底剩余的溶液。
 
3、清洗過濾,溶劑瓶里的過濾頭,其作用是為了防止溶液瓶中的顆粒雜質(zhì)進入到儀器的流路系統(tǒng)中,它的材質(zhì)通常分為玻璃燒結(jié)石英和不銹鋼,如果不慎堵塞會造成流動相吸液不暢,因此必須進行清洗,玻璃材質(zhì)的通常是用稀硝酸泡,而不銹鋼材質(zhì)的可以直接進行超聲清洗。
 
二、液相色譜儀高壓泵的保養(yǎng)
 
泵是液相色譜的核心,泵將流動相從溶劑瓶輸送到液相流路系統(tǒng)中,并要在高壓下保持流量和壓力的穩(wěn)定。狀態(tài)正常的高壓泵是液相色譜準(zhǔn)確分析的基礎(chǔ),所以平日一定要重視對泵的維護。
 
1、泵壓力波動,很多情況下,泵的問題反映在壓力上,壓力波動又是常見的一類問題。通常我們可以通過重新清洗流路和再次脫氣流動相加以解決。
 
2、過濾白頭保養(yǎng),在泵的維護里還有一項常做的工作就是更換清洗閥上的過濾白頭,通常判斷的標(biāo)準(zhǔn)是純水以5mL/min流速清洗的時候,如果壓力超過1MPa則考慮更換。
 
三、液相色譜儀進樣器的保養(yǎng)
 
進樣器分手動和自動兩大類,雖然兩者工作模式不同,但使用的要點是基本一致的。
 
1、防止交叉污染,自動進樣器常見的問題是交叉污染,交叉污染產(chǎn)生的原因很直接,樣品殘留在進樣針內(nèi)外表面,并隨下一次進樣進入色譜系統(tǒng)。要解決交叉污染,主要靠清洗。
 
2、精細操作,手動進樣器的操作要點大致相同,應(yīng)使用液相色譜LC專用進樣針,進樣時插針應(yīng)插到底,不使用時將針頭留在進樣器內(nèi),使用前后都要及時清洗。
 
四、液相色譜儀色譜柱的保養(yǎng)
 
色譜柱是化合物分離的關(guān)鍵。保養(yǎng)良好的色譜柱具有很高的塔板數(shù),且儀器基線平穩(wěn)。
 
1、避免壓力和溫度的急劇變化及任何機械震動。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會影響柱內(nèi)的填充狀況;柱壓的突然升高或降低也會沖動柱內(nèi)填料,因此在調(diào)節(jié)流速時應(yīng)該緩慢進行,在閥進樣時閥的轉(zhuǎn)動不能過緩(如前所述)。
 
2、應(yīng)逐漸改變?nèi)軇┑慕M成,特別是反相色譜中,不應(yīng)直接從有機溶劑改變?yōu)槿渴撬粗嗳弧?/span>
 
3、色譜柱反沖,納譜分析小分子分離液相色譜柱ChromCore系列和EcoPak系列色譜柱可以反沖;納譜分析手性色譜柱UniChiral系列色譜柱可以反沖,反沖可以除去留在柱頭的雜質(zhì)。但是納譜分析生物大分子液相色譜柱BioCore系列色譜柱不要反沖,否則反沖會迅速降低柱效。
 
4、選擇使用適宜的流動相(尤其是pH),以避免固定相被破壞。有時可以在進樣器前面連接一預(yù)柱,分析柱是鍵合硅膠時,預(yù)柱為硅膠,可使流動相在進入分析柱之前預(yù)先被硅膠“飽和”,避免分析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解。
 
5、避免將基質(zhì)復(fù)雜的樣品尤其是生物樣品直接注入柱內(nèi),需要對樣品進行預(yù)處理或者在進樣器和色譜柱之間連接一保護柱。保護柱一般是填有相似固定相的短柱。保護柱可以而且應(yīng)該經(jīng)常更換。
 
6、經(jīng)常用強溶劑沖洗色譜柱,清除保留在柱內(nèi)的雜質(zhì)。在進行清洗時,對流路系統(tǒng)中流動相的置換應(yīng)以相混溶的溶劑逐漸過渡,每種流動相的體積應(yīng)是柱體積的20倍左右,即常規(guī)分析需要50~75ml。
 
下面列舉一些色譜柱的清洗溶劑及順序,作為參考:
 
硅膠柱以正已烷(或庚烷)、二氯甲烷和甲醇依次沖洗,然后再以相反順序依次沖洗,所有溶劑都必須嚴(yán)格脫水。甲醇能洗去殘留的強極性雜質(zhì),已烷使硅膠表面重新活化。
 
反相柱以水、甲醇、乙腈、一氯甲烷(或氯仿)依次沖洗,再以相反順序依次沖洗。
 
如果下一步分析用的流動相不含緩沖液,那么可以省略最后用水沖洗這一步。一氯甲烷能洗去殘留的非極性雜質(zhì),在甲醇(乙腈)沖洗時重復(fù)注射100~200µl四氫呋喃數(shù)次有助于除去強疏水性雜質(zhì)。四氫呋喃與乙腈或甲醇的混合溶液能除去類脂。有時也注射二甲亞砜數(shù)次。此外,用乙腈、丙酮和三氟醋酸(0.1%)梯度洗脫能除去蛋白質(zhì)污染。
 
陽離子交換柱可用稀酸緩沖液沖洗,陰離子交換柱可用稀堿緩沖液沖洗,除去交換性能強的鹽,然后用水、甲醇、二氯甲烷(除去吸附在固定相表面的有機物)、甲醇、水依次沖洗。
 
7、保存色譜柱時應(yīng)將柱內(nèi)充滿乙腈或甲醇,柱接頭要擰緊,防止溶劑揮發(fā)干燥。禁止將緩沖溶液留在柱內(nèi)靜置過晚上或更長時間。
 
8、色譜柱使用過程中,如果壓力升高,一種可能是燒結(jié)濾片被堵塞,這時應(yīng)更換濾片或?qū)⑵淙〕鲞M行清洗;另一種可能是大分子進入柱內(nèi),使柱頭被污染;如果柱效降低或色譜峰變形,則可能柱頭出現(xiàn)塌陷,死體積增大。
 
在后兩種情況發(fā)生時,小心擰開柱接頭,用潔凈小鋼將柱頭填料取出1~2mm高度(注意把被污染填料取凈)再把柱內(nèi)填料整平。然后用適當(dāng)溶劑濕潤的固定相(與柱內(nèi)相同)填滿色譜柱,壓平,再擰緊柱接頭。這樣處理后柱效能得到改善,但是很難恢復(fù)到新柱的水平。
 
柱子失效通常是柱端部分,在分析柱前裝一根與分析柱相同固定相的短柱(5~30mm),可以起到保護、延長柱壽命的作用。采用保護柱會損失一定的柱效,這是值得的。
 
通常以硅膠為基質(zhì)的色譜柱,只能在pH2~9范圍內(nèi)使用。柱子使用一段時間后,可能有一些吸附作用強的物質(zhì)保留于柱頂,特別是一些有色物質(zhì)更易看清被吸著在柱頂?shù)奶盍仙?。新的色譜柱在使用一段時間后柱頂填料可能塌陷,使柱效下降,這時也可補加填料使柱效恢復(fù)。
 
每次工作完后,用洗脫能力強的洗脫液沖洗,例如ODS柱宜用甲醇沖洗至基線平衡。當(dāng)采用鹽緩沖溶液作流動相時,使用完后應(yīng)用無鹽流動相沖洗。含鹵族元素(氟、氯、溴)的化合物可能會腐蝕質(zhì)檢報告不銹鋼管道,不宜長期與之接觸。裝在HPLC儀上柱子如不經(jīng)常使用,應(yīng)每隔4~5天開機沖洗15分鐘。
 
五、液相色譜儀檢測器的保養(yǎng)
 
1、光源部分
 
檢測器中非常重要的部件是光源,光源對發(fā)射能量有要求,一旦能量衰減到一定程度,就會出現(xiàn)基線噪聲變大,靈敏度降低等一系列影響使用的問題,因此光源是一個消耗品。通常紫外燈的壽命是2000h,當(dāng)?shù)竭_這個時限的時候,我們就要特別關(guān)注燈的能量狀況,可以通過儀器維護軟件中自帶的“燈能量測試”功能來判斷,測試的結(jié)果會分別評估低、中、高三個波長段的能量,一旦某個波長段的測試結(jié)果顯示失敗,就表示需要更換燈。
 
2、檢測池
 
檢測器中另一個重要部件是檢測池,也叫流通池。通常大家關(guān)心的一個問題是檢測池被堵掉,因為檢測池通常不是很耐壓,所以一旦被堵就很可能造成損壞。事實上檢測池通常不太容易被堵,原因是幾乎所有的顆粒雜質(zhì)都會被色譜柱攔下了,所以堵塞檢測器的東西基本都不是來自樣品的,很可能是后來“產(chǎn)生”的,比如含鹽流動相殘留在檢測池中導(dǎo)致鹽析出。
 
六、廢液的處置
 
液相色譜儀LC的廢液大部分含有有機溶劑,會對人體產(chǎn)生一定的危害,對環(huán)境也會產(chǎn)生污染,嚴(yán)禁隨意傾倒,應(yīng)及時處理。目前,國內(nèi)大部分實驗室是將廢液送到專門的廢液處理站集中進行無害化處理。

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