譜析淺談色譜柱老化的基本概念和主要誤區(qū)剖析
2020-09-02 09:06:39來(lái)源：admin
老化色譜柱是氣相色譜儀實(shí)驗(yàn)員常做的一個(gè)操作，色譜柱沒(méi)有老化或者老化不完全會(huì)引起很多問(wèn)題，因此很多人養(yǎng)成了遇到問(wèn)題先老化再說(shuō)的習(xí)慣。然而實(shí)際應(yīng)用中發(fā)現(xiàn)很多人對(duì)老化這一問(wèn)題存在諸多的誤解，有時(shí)候老化不僅達(dá)不到效果，反而是情況更糟糕。為此，譜析色譜小編對(duì)老化的問(wèn)題進(jìn)行了一些歸納總結(jié)，逐一進(jìn)行剖析如下。
老化的基本概念
“老化”一詞在不同情況下有不同的含義，操作上也有極大的區(qū)別，是首先必須明確的問(wèn)題。
（1）制備性質(zhì)的老化：在制備色譜柱的時(shí)候，僅僅進(jìn)行填充或者涂覆是遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠的，還要涉及到趕跑固定相中殘留的溶劑和其他被吸附的雜質(zhì)、去除分子量低和熱不穩(wěn)定的組分、使固定相均勻鋪展、使固定相交聯(lián)固化、……等多個(gè)步驟，這些步驟是制備色譜柱必不可少的，而且一般都在較高柱溫下進(jìn)行，習(xí)慣上稱(chēng)為“老化”。這里用“老化”一詞具有種植農(nóng)作物生長(zhǎng)、老熟的類(lèi)似含義。從這一意義上講，對(duì)于一根色譜柱，制備性質(zhì)的老化操作只會(huì)有一次，在色譜柱的整個(gè)壽命周期中不存在再次老化的問(wèn)題。同時(shí)，這種老化操作也是十分麻煩的，不同色譜柱都有特定的溫度和時(shí)間要求，往往需要多階的程序升溫，進(jìn)行交聯(lián)固化操作對(duì)溫度的控制更為嚴(yán)格，整個(gè)過(guò)程需要十幾個(gè)小時(shí)甚至數(shù)天。
（2）凈化性質(zhì)的老化：色譜柱在使用和保存的過(guò)程中會(huì)因?yàn)楦鞣N原因而吸附雜質(zhì)，進(jìn)而導(dǎo)致基線(xiàn)不穩(wěn)定、分離選擇性發(fā)生改變等問(wèn)題，此時(shí)往往通過(guò)升高柱溫使雜質(zhì)脫附。這一操作在形式上與新制備色譜柱的老化過(guò)程很相似，因此也稱(chēng)作“老化”，但是在目的上是顯著不同的，稱(chēng)作“凈化”似乎更加合適。根據(jù)具體情況的不同，這種凈化性質(zhì)的老化又分為三種：①測(cè)試復(fù)雜樣品時(shí)，目標(biāo)物出峰較早，但是仍然要升溫到較高的柱溫，使其他高沸點(diǎn)組分流出色譜柱；②一段時(shí)間沒(méi)有使用后，色譜柱在放置過(guò)程中吸附了空氣中的雜質(zhì)，再次使用前需升高溫度排出吸附的雜質(zhì)；③色譜柱長(zhǎng)期使用中逐漸積累了大量的污染物（來(lái)自于載氣、管路、樣品、固定相自身降解等），需要升高溫度運(yùn)行較長(zhǎng)時(shí)間，使污染物完全排出。
在明確了上述概念上的區(qū)別后，實(shí)際應(yīng)用中的很多誤區(qū)就能被糾正了。首先應(yīng)該知道的就是，實(shí)驗(yàn)人員日常提到的老化操作，實(shí)際上都是凈化性質(zhì)的老化，目的是除去各種污染性的雜質(zhì)。然后要考慮的是根據(jù)雜質(zhì)的具體情況選擇最合適的老化溫度條件。而制備性質(zhì)的老化，目前是幾乎不會(huì)用到的，因?yàn)楝F(xiàn)在基本不上都買(mǎi)商品柱使用，正規(guī)廠家的色譜柱在出廠前都是按最佳工藝條件老化好并經(jīng)過(guò)嚴(yán)格測(cè)試的，不需要用戶(hù)自行老化。下面收集了實(shí)踐中常見(jiàn)的九個(gè)誤區(qū)，逐一進(jìn)行辨析。
誤區(qū)1、新買(mǎi)來(lái)的色譜柱一定要老化過(guò)后才能用
這句話(huà)屬于看書(shū)不仔細(xì)的以訛傳訛，早期的色譜書(shū)籍里面寫(xiě)的都是：新制備的色譜柱必須老化后才能使用。以前商品柱不多，大部分都是使用人員自己裝填填充柱，裝填好之后必須自行老化，也就是前面提到的制備性質(zhì)的老化。而目前普遍使用商品化的毛細(xì)管柱，出廠前都是老化并且測(cè)試過(guò)的，并不需要自行老化。我們買(mǎi)來(lái)新柱子打開(kāi)盒子都能看到測(cè)試報(bào)告和譜圖，想一想，要是沒(méi)有老化好，譜圖和測(cè)試結(jié)果哪來(lái)的？
那么是不是新買(mǎi)的柱子就能直接用呢？當(dāng)然不是運(yùn)輸儲(chǔ)存過(guò)程中，色譜柱會(huì)吸附空氣中的雜質(zhì)，直接使用必然基線(xiàn)不平、存在鬼峰，需要進(jìn)行凈化性質(zhì)的老化操作，也就是把雜質(zhì)趕跑。但是這種凈化性質(zhì)的老化是比較簡(jiǎn)單，按通常的使用情況進(jìn)行連接和條件設(shè)置即可，柱溫按方法要求的最高溫度（或者略高10~20度），跑到基線(xiàn)平直就好了，通常一小時(shí)左右即可完成。
誤區(qū)2、老化色譜柱一定要斷開(kāi)并關(guān)閉檢測(cè)器
這一說(shuō)法并不完全正確，要看具體情況。雖然很多教材和專(zhuān)著上都有這種說(shuō)法，但是要注意，其所說(shuō)的老化也是特指制備色譜柱時(shí)候的第一次老化，這時(shí)候會(huì)有大量固定相的雜質(zhì)流出，如不斷開(kāi)檢測(cè)器，必然造成嚴(yán)重的污染。而對(duì)于凈化性質(zhì)的老化，斷開(kāi)檢測(cè)器不是必須的，特別是對(duì)于FID這種檢測(cè)器，完全沒(méi)有必要斷開(kāi)檢測(cè)器老化。因?yàn)镕ID是破壞性檢測(cè)器，并且可以在很高的溫度下使用，只要檢測(cè)器溫度略高于柱溫，流出物就能完全燃燒掉，不存在冷凝、殘留等問(wèn)題。
不過(guò)還是要注意，實(shí)際應(yīng)用中一定要具體問(wèn)題具體分析，不能一概而論。當(dāng)色譜柱污染較為嚴(yán)重，并且使用TCD、MS這類(lèi)檢測(cè)器時(shí)，還是建議斷開(kāi)檢測(cè)器進(jìn)行老化。因?yàn)檫@類(lèi)檢測(cè)器屬于非破壞性檢測(cè)器，并且設(shè)置的溫度往往也不能太高，流出的雜質(zhì)比較容易產(chǎn)生冷凝和污染。另外，在斷開(kāi)檢測(cè)器進(jìn)行老化時(shí)，一定要將不用的進(jìn)樣口、檢測(cè)器等部件在柱箱內(nèi)的接頭堵死，否則流出的污染物會(huì)在柱箱四周冷凝，還是有污染檢測(cè)器、進(jìn)樣口的危險(xiǎn)。如果有條件，與檢測(cè)器斷開(kāi)的柱子出口，最好通過(guò)適當(dāng)?shù)墓苈穼U氣引到柱箱外。
誤區(qū)3、老化色譜柱一定要升溫到標(biāo)稱(chēng)的最高使用溫
這一說(shuō)法同樣是針對(duì)制備性質(zhì)的老化操作而言的。聚合物固定相中往往含有一定量的低聚物，熱穩(wěn)定性低于高分子量的聚合物，如果不除去，使用時(shí)會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重的流失。因此對(duì)于新制備的色譜柱，必須要加熱到足夠高的溫度并且保持足夠長(zhǎng)的時(shí)間，從而保證低聚物完全恢復(fù)除去。而對(duì)于常規(guī)使用過(guò)程中進(jìn)行凈化性質(zhì)的老化操作，只要在方法要求的最高溫度（或者略高10~20度）下跑到基線(xiàn)平直，就說(shuō)明干擾測(cè)定的雜質(zhì)已經(jīng)完全除去了，沒(méi)必要使用更高的老化溫度。經(jīng)常在極限溫度下進(jìn)行老化是有損色譜柱壽命的，并且有些廠家存在虛標(biāo)最高使用溫度的問(wèn)題，切勿盲目的用標(biāo)稱(chēng)的最高溫度老化柱子。
誤區(qū)4、老化色譜柱一定要程序升溫，并且要多次循環(huán)、老化過(guò)夜
對(duì)于新制備的色譜柱，是必須逐漸升溫老化的，因此往往設(shè)置多階程序升溫。因?yàn)樾律V柱老化涉及到溶劑揮發(fā)、交聯(lián)反應(yīng)、排出殘余低聚物等多個(gè)步驟，每個(gè)步驟適宜的溫度都不一樣，如果一開(kāi)始就升溫到最高溫度，產(chǎn)生的結(jié)果往往是破壞涂層，色譜柱就損壞了。而對(duì)于常規(guī)使用，色譜柱的污染只要不是很?chē)?yán)重，通常可以直接升溫到設(shè)定溫度，溫度穩(wěn)定后一般只需20~30分鐘基線(xiàn)就開(kāi)始表現(xiàn)為下降的趨勢(shì)，多數(shù)情況下一兩個(gè)小時(shí)后就能老化到基線(xiàn)平直了。如果長(zhǎng)時(shí)間基線(xiàn)都不降低或者波動(dòng)仍然很大，就應(yīng)該考慮是否存在其他問(wèn)題了，例如載氣是否純凈、是否泄漏、除色譜柱外是否還有其他地方污染、檢測(cè)器是否正常、等等。
至于多次循化的操作，其實(shí)是完全沒(méi)有必要的，因?yàn)榛€(xiàn)降低且達(dá)到平直已經(jīng)說(shuō)明色譜柱中的雜質(zhì)已經(jīng)完全排出了。此時(shí)可以降溫后空走一次升溫程序，應(yīng)該得到比較平直的基線(xiàn)，除了柱流失導(dǎo)致的基線(xiàn)少許抬升外，應(yīng)沒(méi)有其他雜峰。如果仍然存在明顯雜峰或漂移，一般就不是色譜柱的問(wèn)題了，往往更可能是進(jìn)樣口有污染或者隔墊有流失，應(yīng)排查其他的問(wèn)題，而不是繼續(xù)盲目老化柱子。
但是同樣要注意特殊情況，例如，當(dāng)柱子污染很?chē)?yán)重，吸附的雜質(zhì)非常多的時(shí)候，老化時(shí)最好要逐漸升溫。因?yàn)榇罅侩s質(zhì)在高溫作用下快速溢出有可能破壞固定相的液膜；而且有些物質(zhì)熱穩(wěn)定性比較差，快速升溫時(shí)會(huì)出現(xiàn)還沒(méi)來(lái)得及揮發(fā)就分解碳化的現(xiàn)象，一旦碳化就無(wú)法排出色譜柱了。對(duì)于分子篩、氧化鋁、多孔聚合物等吸附型的色譜柱，高溫排出雜質(zhì)的速度比較慢，老化需要的時(shí)間是比較長(zhǎng)的，例如分子篩柱往往要250~280度老化10小時(shí)以上才能完全除去吸附的水分。
誤區(qū)5、老化時(shí)要降低載氣流速
這一說(shuō)法也是真的新制備的色譜柱進(jìn)行第一次老化而言的。因?yàn)閯倓偼扛埠玫纳V柱，其液膜還未均勻鋪展，并且還沒(méi)有交聯(lián)固定，此時(shí)若使用很高的載氣流速可能導(dǎo)致液膜移動(dòng)，變得厚薄不均。并且較大的載氣流速還容易導(dǎo)致未交聯(lián)的組分揮發(fā)損失。而對(duì)于常規(guī)使用中的色譜柱，進(jìn)行凈化性質(zhì)的老化時(shí)，按正常條件設(shè)置載氣流速即可，通常無(wú)需進(jìn)行特別的改動(dòng)。
誤區(qū)6、老化柱子一定要用氮?dú)庾鲚d氣
氮?dú)馐亲畛Ｓ玫妮d氣，但不等于只能用氮?dú)庾鲚d氣。老化的時(shí)候也是同樣的，多數(shù)情況都是可以用氫氣或者其他載氣的，而且往往用氫氣效果會(huì)更好。因?yàn)闅錃獾膫髻|(zhì)阻力小、線(xiàn)速度較高，有利于低沸點(diǎn)雜質(zhì)排出色譜柱。但是對(duì)于色譜柱尾端與檢測(cè)器斷開(kāi)的情況，顯然不能用氫氣最為載氣進(jìn)行老化，因?yàn)闅錃馀湃胫鋬?nèi)部是十分危險(xiǎn)的。對(duì)于一些特殊的柱子，載氣的選擇是有特定要求的，例如分子篩柱要用來(lái)測(cè)微量氧氣，就一定不能用氫氣作為載氣進(jìn)行老化，否則對(duì)氧氣會(huì)產(chǎn)生不可逆吸附；又例如氧化鋁柱表面需要吸附適當(dāng)?shù)乃植拍苡羞m中的分離選擇性，因此在老化氧化鋁柱時(shí)要用含有一定水分的載氣才行。
誤區(qū)7、老化色譜柱的時(shí)候把進(jìn)樣口溫度也設(shè)高一點(diǎn)，這樣就可以一起老化
從原理上來(lái)說(shuō)，這種做法沒(méi)有問(wèn)題，有時(shí)候不失為一種偷懶的竅門(mén)。當(dāng)隔墊有少量流失，或者襯管有少量污染的時(shí)候，通過(guò)提高進(jìn)樣口溫度來(lái)烘烤是可以除去的。但實(shí)際做的時(shí)候常常會(huì)引起很多問(wèn)題，因?yàn)檫@樣進(jìn)行烘烤，雜質(zhì)首先進(jìn)入了色譜柱，如果保留較強(qiáng)，有污染色譜柱的風(fēng)險(xiǎn)。即使不會(huì)永久性污染，雜質(zhì)排出的速度肯定也要比直接烘烤慢得多。所以在老化色譜柱的時(shí)候，進(jìn)樣口溫度不應(yīng)該設(shè)置太高。如果進(jìn)樣口存在污染，最好的辦法是拆開(kāi)后用溶劑清洗，然后在烘箱中烘烤干。只有在污染輕微、并且短時(shí)間內(nèi)無(wú)法進(jìn)行清洗的時(shí)候，才用直接提高進(jìn)樣口溫度烘烤的辦法，這實(shí)屬不得已而為的下策，不宜經(jīng)常使用。
誤區(qū)8、老化的時(shí)候打幾針溶劑進(jìn)去，這樣可以把臟東西洗出來(lái)
注射溶劑有時(shí)候?qū)τ谌コM(jìn)樣口的污染是有效的，但一般是拆除色譜柱進(jìn)行操作，因?yàn)檫@樣會(huì)把污染物從進(jìn)樣口沖洗到色譜柱里面去，而且大量溶劑進(jìn)入色譜柱也是不利的。弱極性溶劑，例如甲苯、氯仿等，對(duì)于固定相有一定溶解作用；強(qiáng)極性溶劑，例如甲醇、乙醇等，會(huì)促進(jìn)固定相的分解。即使是目前比較先進(jìn)的交聯(lián)鍵合固定相，在大量溶劑的作用下，穩(wěn)定性也會(huì)有所降低，特別是在老化色譜柱時(shí)柱溫很高，固定相更容易與注入的大量溶劑產(chǎn)生反應(yīng)。曾經(jīng)試驗(yàn)過(guò)，wax柱在柱溫100度時(shí)注入0.5uL甲醇，檢測(cè)到的柱流失會(huì)顯著大于空白水平?？梢韵胂?，在更高的柱溫下注入大量溶劑，對(duì)色譜柱的損害肯定是更大的。
誤區(qū)9、老化可以恢復(fù)色譜柱的性能，效果不好的時(shí)候先老化再說(shuō)
這一觀點(diǎn)是很多實(shí)驗(yàn)員的經(jīng)驗(yàn)總結(jié)，因?yàn)楹芏鄦?wèn)題都是沒(méi)有老化色譜柱造成的，大量問(wèn)題在老化色譜柱后都能獲得改善。但是切勿陷入經(jīng)驗(yàn)主義、教條主義的誤區(qū)。再次強(qiáng)調(diào)，日常使用中老化的作用是除去殘留在色譜柱中的雜質(zhì)，因此大部分由雜質(zhì)殘留引起的問(wèn)題是可以通過(guò)老化解決的。而其他原因產(chǎn)生的問(wèn)題卻不行。例如基線(xiàn)漂移大、噪聲大的問(wèn)題有可能是載氣不純或漏氣引起的，此時(shí)如果盲目進(jìn)行老化，色譜柱反而會(huì)進(jìn)一步損壞。色譜柱高溫?fù)p壞后也會(huì)表現(xiàn)為噪聲大，這是固定相分解造成的，此時(shí)如果還盲目高溫老化，無(wú)異于雪上加霜，只會(huì)讓損壞更加嚴(yán)重。即使是有雜質(zhì)殘留引起的問(wèn)題，也不是所有殘留物都能通過(guò)高溫除去。對(duì)于無(wú)機(jī)酸、堿、鹽、大分子有機(jī)物等沸點(diǎn)極高的殘留物，一般只能通過(guò)截去柱頭來(lái)解決，如果盲目高溫老化，只會(huì)導(dǎo)致固定相進(jìn)一步分解、殘留物碳化等更嚴(yán)重的問(wèn)題?？傊?，遇到問(wèn)題一定要找到關(guān)鍵，認(rèn)真分析原因，做到對(duì)癥下藥。切不可盲目聽(tīng)信萬(wàn)能偏方。
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